Tipos de cultivo celular

Tipos de cultivo celular

Tipos de técnicas de cultivo celular

Aconsejamos no utilizar cultivos de otros laboratorios porque: Independientemente de su origen (comprados o prestados), asegúrese de que todas las líneas celulares nuevas se someten a pruebas de contaminación por micoplasma antes de empezar a utilizarlas.

Existen dos técnicas de cultivo celular para hacer crecer las células en cultivo, como monocapas sobre un sustrato artificial (es decir, cultivo adherente) o flotando libremente en el medio de cultivo (cultivo en suspensión). La mayoría de las células derivadas de los vertebrados, con la excepción de las líneas celulares hematopoyéticas, son dependientes del anclaje y tienen que cultivarse en una matriz extracelular adecuada para permitir la adhesión y la propagación de las células (es decir, cultivo de tejidos tratados). Sin embargo, muchas líneas celulares también pueden adaptarse al cultivo en suspensión. Las células que se cultivan en suspensión pueden mantenerse en frascos de cultivo que no estén tratados con cultivo de tejidos.

Paso de célulasEl paso de una línea celular es una técnica de cultivo celular en la que se retira el medio de cultivo celular y se transfieren las células de un cultivo anterior a un medio de crecimiento fresco, una técnica de cultivo celular que permite el crecimiento posterior de la línea celular.  El crecimiento de las células en cultivo pasa de la fase de retardo tras la siembra a la fase logarítmica, en la que las células proliferan exponencialmente. Cuando las células en cultivos adherentes ocupan todo el sustrato disponible y no les queda espacio para expandirse, o cuando las células en cultivos en suspensión superan la capacidad del medio para soportar un mayor crecimiento, la proliferación celular se reduce o cesa por completo. Para mantener el cultivo a una densidad óptima para el crecimiento celular continuado y para estimular una mayor proliferación, hay que dividir el cultivo y suministrar medio fresco.  Para algunas técnicas de cultivo celular, como la transfección, es importante que las células estén en fase logarítmica, ya que esto mejorará la eficacia de la transfección.

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Pasos del cultivo celular

El cultivo celular es una herramienta inestimable que proporciona a los científicos sistemas modelo para estudiar la fisiología y la bioquímica de las células, tanto sanas como enfermas. Menos costosos y más fáciles de trabajar que los organismos completos, la reproducibilidad de los cultivos celulares hace que se utilicen ampliamente tanto en la investigación como en la fabricación a gran escala de compuestos biológicos.

Los cultivos celulares primarios se crean cuando las células se recogen directamente del tejido animal o vegetal y se cultivan in vitro. Una vez establecidos, el subcultivo de las células primarias crea un cultivo celular secundario que, a diferencia de las líneas celulares, no se divide indefinidamente. Como la mayoría de las células acaban dejando de dividirse (un proceso normal conocido como senescencia), las células primarias y sus subcultivos tienen una vida limitada. Sin embargo, es posible que estos cultivos celulares se transformen en una línea celular inmortal. Esta transformación puede producirse de forma espontánea o mediante inducción química o vírica, momento en el que la línea celular en cuestión se convierte en continua y puede mantenerse durante un tiempo prolongado.

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Aconsejamos no utilizar cultivos de otros laboratorios porque: Independientemente de su origen (comprados o prestados), asegúrese de que todas las líneas celulares nuevas se someten a pruebas de contaminación por micoplasma antes de empezar a utilizarlas.

Existen dos técnicas de cultivo celular para hacer crecer las células en cultivo, como monocapas sobre un sustrato artificial (es decir, cultivo adherente) o flotando libremente en el medio de cultivo (cultivo en suspensión). La mayoría de las células derivadas de los vertebrados, con la excepción de las líneas celulares hematopoyéticas, son dependientes del anclaje y tienen que cultivarse en una matriz extracelular adecuada para permitir la adhesión y la propagación de las células (es decir, cultivo de tejidos tratados). Sin embargo, muchas líneas celulares también pueden adaptarse al cultivo en suspensión. Las células que se cultivan en suspensión pueden mantenerse en frascos de cultivo que no estén tratados con cultivo de tejidos.

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Paso de célulasEl paso de una línea celular es una técnica de cultivo celular en la que se retira el medio de cultivo celular y se transfieren las células de un cultivo anterior a un medio de crecimiento fresco, una técnica de cultivo celular que permite el crecimiento posterior de la línea celular.  El crecimiento de las células en cultivo pasa de la fase de retardo tras la siembra a la fase logarítmica, en la que las células proliferan exponencialmente. Cuando las células en cultivos adherentes ocupan todo el sustrato disponible y no les queda espacio para expandirse, o cuando las células en cultivos en suspensión superan la capacidad del medio para soportar un mayor crecimiento, la proliferación celular se reduce o cesa por completo. Para mantener el cultivo a una densidad óptima para el crecimiento celular continuado y para estimular una mayor proliferación, hay que dividir el cultivo y suministrar medio fresco.  Para algunas técnicas de cultivo celular, como la transfección, es importante que las células estén en fase logarítmica, ya que esto mejorará la eficacia de la transfección.

Conceptos básicos de los cultivos celulares

Los procesos y procedimientos de cultivo celular varían según el tipo de célula y la aplicación. Hay que tener en cuenta que si las células no se manipulan de forma adecuada para cada proceso, sus características pueden cambiar. En esta sección se presentan los procesos y procedimientos generales de cultivo celular, a la vez que se señalan puntos importantes a tener en cuenta.

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Hay dos métodos para obtener células: de un banco de células o aislando células de un tejido de un donante. Cuando se inicia el cultivo a partir de células obtenidas de un banco de células, hay que pasar por los procedimientos de “descongelación”, “siembra de células” y “observación de células”.

Cuando se utiliza tejido recogido de un donante, se suele eliminar el tejido innecesario si está adherido. Existen dos métodos principales para aislar las células del tejido, el cultivo de explantes y el método enzimático. En los métodos enzimáticos, se aíslan las células del tejido de interés utilizando una solución enzimática proteolítica. Si se utiliza una enzima, se debe diluir la enzima o detener la reacción enzimática con un inhibidor de la reacción enzimática, y luego proceder con los pasos de “siembra de células” y “observación de células” para preparar el cultivo celular.

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